Dedos de zinc unidos al ADNWIKIMEDIA COMMONS, THOMAS SPLETTSTOESSER<\/p>\n
Las nucleasas de dedos de zinc est\u00e1n dise\u00f1adas para ser como misiles buscadores de calor, dirigidos con precisi\u00f3n para encontrar y cortar secuencias espec\u00edficas de ADN. De vez en cuando, sin embargo, pueden cortar en el lugar equivocado, provocando roturas no deseadas. Dos art\u00edculos publicados hoy (7 de agosto) en revistas de Nature <\/em> describen formas de encontrar sistem\u00e1ticamente tales acciones fuera del objetivo, que alg\u00fan d\u00eda podr\u00edan ayudar a dise\u00f1ar terapias g\u00e9nicas que eviten da\u00f1os colaterales.<\/p>\n &ldquo ;Hasta este momento, no ha habido una forma realmente completa de definir la especificidad de la nucleasa con dedos de zinc” dijo Carlos Barbas, bi\u00f3logo qu\u00edmico del Instituto de Investigaci\u00f3n Scripps en La Jolla, California, que no particip\u00f3 en el estudio. \u00abA medida que comenzamos a tratar pacientes con nucleasas con dedos de zinc y modificar genomas, necesitamos saber d\u00f3nde se est\u00e1n realizando esas modificaciones\u00bb.<\/p>\n Dedos de zinc, llamados as\u00ed porque su estructura se asemeja a una mano con una punta dedo, se unen a diferentes nucle\u00f3tidos de tres letras…<\/p>\n Pero no es un sistema perfecto: a veces la mol\u00e9cula puede unirse y cortar una secuencia de ADN diferente, casi id\u00e9ntica, potencialmente matando c\u00e9lulas.<\/p>\n Para caracterizar sistem\u00e1ticamente esos sitios de escisi\u00f3n fuera del objetivo, el bi\u00f3logo qu\u00edmico de Harvard David Liu y sus colegas probaron dos ZFN en una biblioteca de 100 mil millones de fragmentos de ADN, algunos de los cuales aparecen en el genoma humano. La mayor\u00eda de las veces, las nucleasas escindieron el sitio objetivo. Pero ocasionalmente tambi\u00e9n cortaron otras secuencias similares, incluido un gen asociado con una v\u00eda de se\u00f1alizaci\u00f3n del c\u00e1ncer.<\/p>\n Una interpretaci\u00f3n superficial de nuestro art\u00edculo podr\u00eda llevar a uno a ser pesimista sobre las nucleasas con dedos de zinc, pero en realidad soy optimista, dijo Liu. Adem\u00e1s de confirmar que la cantidad de rupturas fuera del objetivo disminuy\u00f3 con concentraciones m\u00e1s bajas de ZFN, los investigadores encontraron que el uso de ZFN que se unen con menos avidez a la secuencia objetivo parec\u00eda tener menos interrupciones no intencionales, dijo. Eso sugiere que puede ser posible dise\u00f1ar terapias ZFN de una manera que minimice esos efectos fuera del objetivo. Los investigadores publicaron sus resultados en Nature Methods<\/em>.<\/p>\n En el segundo estudio, publicado en Nature Biotechnology<\/em>, los investigadores dosificaron c\u00e9lulas de leucemia humana con un ZFN que corta el receptor CCR-5. Identificaron las ubicaciones de corte al transfectar las c\u00e9lulas con part\u00edculas de virus etiquetadas que se un\u00edan a los extremos rotos del ADN y descubrieron que, en general, el ZFN se un\u00eda al ADN CCR-5 objetivo. Sin embargo, aproximadamente 1 de cada 20.000 veces, escindi\u00f3 un segundo gen del receptor en una secuencia casi id\u00e9ntica, as\u00ed como algunas otras secuencias similares incluso m\u00e1s raramente. Pero los investigadores usaron una concentraci\u00f3n extremadamente alta de ZFN, y usaron una l\u00ednea celular que es muy permisiva con la acci\u00f3n de ZFN, para ver cu\u00e1l ser\u00eda el peor de los casos, dijo el coautor Phillip Gregory, director cient\u00edfico de Sangamo BioSciences. La baja tasa de cortes fuera del objetivo, incluso en estas condiciones, valida nuestras expectativas de que las prote\u00ednas ser\u00edan tremendamente espec\u00edficas, y sugiere que casi nunca se esperar\u00eda que dosis m\u00e9dicas mucho m\u00e1s bajas aplicadas en la cl\u00ednica causaran cortes fuera del objetivo, dijo.<\/p>\n Los m\u00e9todos podr\u00edan usarse alg\u00fan d\u00eda en el desarrollo temprano de f\u00e1rmacos para elegir candidatos con la mejor especificidad, dijo Barbas. Sin embargo, no est\u00e1 claro qu\u00e9 tan completas son las nuevas pruebas ZFN, dijo. El m\u00e9todo de part\u00edculas de virus etiquetadas, por ejemplo, puede pasar por alto alguna escisi\u00f3n fuera del objetivo, porque las etiquetas virales pueden no unirse a cada ruptura. Adem\u00e1s, agreg\u00f3 Barbas, a diferencia del ADN en un tubo de ensayo, el ADN celular est\u00e1 fuertemente enrollado en la cromatina, por lo que muchos de los sitios de uni\u00f3n encontrados por el m\u00e9todo del tubo de ensayo podr\u00edan protegerse de los ZFN y nunca cortarse en las c\u00e9lulas vivas.<\/p>\n Entonces, si bien las nuevas pruebas pueden ser herramientas clave para el desarrollo temprano de f\u00e1rmacos, solo se obtendr\u00e1 una imagen completa una vez que se pueda obtener la secuencia completa del genoma de una persona por $ 1000, dijo, cuando los investigadores puedan evaluar a las personas que reciben tratamientos ZFN para cada off- rotura de objetivo.<\/p>\n R. Gabriel, et. al, Un an\u00e1lisis imparcial de todo el genoma de la especificidad de la nucleasa de dedo de zinc, Nature Biotechnology<\/em>, doi:10.1038\/nbt.1948, 2011.<\/strong><\/p>\n V . Pattanayak, et. al, Revelaci\u00f3n de las especificidades de escisi\u00f3n fuera del objetivo de las nucleasas con dedos de zinc mediante selecci\u00f3n in vitro, Nature Methods, <\/em>doi:10.1038\/nmeth.1670, 2011.<\/strong><\/p>\n Reciba acceso completo a m\u00e1s de 35 a\u00f1os de archivos<\/strong>, as\u00ed como a TS Digest<\/em><\/strong>, ediciones digitales de The Scientist<\/em><\/strong>, art\u00edculos<\/strong> y mucho m\u00e1s. \u00danase gratis hoy \u00bfYa es miembro? Inicie sesi\u00f3n aqu\u00ed<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":" Dedos de zinc unidos al ADNWIKIMEDIA COMMONS, THOMAS SPLETTSTOESSER Las nucleasas de dedos de zinc est\u00e1n dise\u00f1adas para ser como misiles buscadores de calor, dirigidos con precisi\u00f3n para encontrar y cortar secuencias espec\u00edficas de ADN. De vez en cuando, sin embargo, pueden cortar en el lugar equivocado, provocando roturas no deseadas. 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