eMAP permite etiquetar m\u00faltiples prote\u00ednas en la misma sinapsis. En un nuevo estudio, los investigadores demostraron etiquetar hasta seis. Aqu\u00ed vemos tres: Fagot en azul, Piccolo en magenta y PSD-95 en verde. Los tres se combinan en el panel de la derecha. Cr\u00e9dito: Chung Lab\/MIT Picower Institute <\/p>\n
La gloria de las tecnolog\u00edas de expansi\u00f3n de tejidos es que cuando las estructuras, como las prote\u00ednas que construyen las conexiones de las c\u00e9lulas nerviosas, son demasiado peque\u00f1as para que las resuelva un microscopio, la qu\u00edmica inteligente puede hacer que todo sea m\u00e1s grande y m\u00e1s f\u00e1cil de ver. . Pero a veces los enlaces qu\u00edmicos involucrados se forman justo donde las etiquetas de anticuerpos fluorescentes deben unirse a las prote\u00ednas para hacerlas visibles. Ahora, un equipo de investigadores del MIT ha resuelto el problema, demostrando grandes mejoras en la obtenci\u00f3n de im\u00e1genes de la estructura de las conexiones neuronales con microscopios confocales est\u00e1ndar. <\/p>\n
La actualizaci\u00f3n se implementa en \u00abeMAP\u00bb, una versi\u00f3n nueva y mejorada del \u00aban\u00e1lisis ampliado del proteoma\u00bb o MAP, tecnolog\u00eda presentada en 2016 por el laboratorio del profesor asociado Kwanghun Chung. La \u00abe\u00bb significa conservaci\u00f3n de ep\u00edtopos, lo que significa que es mucho menos probable que se bloqueen los sitios de uni\u00f3n para las etiquetas de anticuerpos fluorescentes. En un art\u00edculo reciente en Science Advances, Chung y los coautores muestran que con eMAP, muchas prote\u00ednas en las conexiones neuronales, o \u00absinapsis\u00bb, ahora se pueden visualizar cuando antes no se pod\u00eda.<\/p>\n
\u00abeMAP conserva el arquitectura molecular a escala fina de las sinapsis y puede facilitar el an\u00e1lisis de alto rendimiento de conjuntos macromoleculares con su excepcional compatibilidad con la gran biblioteca de anticuerpos disponibles en el mercado\u00bb, informan los cient\u00edficos, incluidos los autores principales Joha Park, Sarim Khan y Dae Hee Yun. Trabajan con Chung en sus laboratorios que abarcan el Instituto Picower para el Aprendizaje y la Memoria, el Instituto de Ingenier\u00eda y Ciencias M\u00e9dicas y los Departamentos de Ingenier\u00eda Qu\u00edmica y Ciencias del Cerebro y Cognitivas (BCS) del MIT.<\/p>\n
Exposici\u00f3n de ep\u00edtopos<\/p>\n
Las tecnolog\u00edas de expansi\u00f3n tisular funcionan mediante la infusi\u00f3n de una malla de acrilamida en los tejidos para anclar todas las prote\u00ednas de modo que cuando se expande la malla, todas se expanden con ella pero permanecen en el mismo lugar unas con respecto a otras. Las tecnolog\u00edas t\u00edpicamente logran ese anclaje con enlaces qu\u00edmicos del formaldeh\u00eddo fijador. El avance clave del equipo con eMAP fue reconfigurar el m\u00e9todo para prescindir de esos enlaces qu\u00edmicos a favor de tejer la malla tan finamente, con m\u00e1s acrilamida, que las prote\u00ednas simplemente se enredan f\u00edsicamente con ella. Eso dej\u00f3 a los preciados ep\u00edtopos de las prote\u00ednas m\u00e1s abiertos para unirse mediante etiquetas de anticuerpos fluorescentes.<\/p>\n
\u00abUno de los descubrimientos que hicimos es que no era necesario introducir componentes de hidrogel durante el paso de perfusi\u00f3n cuando hab\u00eda formaldeh\u00eddo presente\u00bb. , como lo fue en la realizaci\u00f3n original de MAP, para lograr una expansi\u00f3n robusta del tejido\u00bb, dijo Yun.<\/p>\n
Park explic\u00f3 adem\u00e1s: \u00abAl eliminar el formaldeh\u00eddo antes de agregar la soluci\u00f3n de MAP, podr\u00edamos evitar el entrecruzamiento qu\u00edmico entre las prote\u00ednas y la malla de hidrogel; podr\u00edamos encontrar una condici\u00f3n \u00f3ptima que pudiera anclar permanentemente las biomol\u00e9culas mientras permit\u00eda que los anticuerpos se difundieran muy profundamente dentro del tejido\u00bb.<\/p>\n
En las pruebas encontraron que entre las prote\u00ednas sin\u00e1pticas, 49 de 51 Las etiquetas de anticuerpos ahora pod\u00edan unirse con eMAP, mientras que solo 35 pod\u00edan hacerlo con MAP.<\/p>\n
Usando eMAP, los investigadores etiquetaron componentes de prote\u00ednas tanto en el lado presin\u00e1ptico (fagot) como en el lado postsin\u00e1ptico (PSD-95) de una sinapsis excitatoria en un rat\u00f3n. Cr\u00e9dito: Chung Lab\/MIT Picower Institute <\/p>\n
Viendo sinapsis<\/p>\n
Para explorar el valor neurocient\u00edfico de tener estas nuevas capacidades de etiquetado en tejido expandido, el equipo uni\u00f3 fuerzas con dos laboratorios BCS que estudian diferentes sinapsis de mam\u00edferos: la de Elly Nedivi, William R. (1964) & Linda R. Young Professor of Neuroscience, y Guoping Feng, James W. (1963) and Patricia T. Poitras Professor.<\/p>\n
Las colaboraciones produjeron im\u00e1genes vibrantes, sin necesidad de para cualquier amplificaci\u00f3n, de prote\u00ednas previamente excluidas, como Bassoon y Piccolo, o que apenas aparec\u00edan antes, como Homer1. Las im\u00e1genes mostraban claramente c\u00f3mo se organizaban las prote\u00ednas dentro de las sinapsis, lo que permit\u00eda medir las distancias relativas entre s\u00ed y tambi\u00e9n su abundancia relativa.<\/p>\n
eMAP tambi\u00e9n permiti\u00f3 obtener im\u00e1genes multiescala de sinapsis a lo largo de ramas neuronales completas, o dendritas, lo que significa que fue f\u00e1cil para los investigadores no solo ver dentro de cada casa de sinapsis metaf\u00f3rica, sino tambi\u00e9n alejarse a todo el vecindario de la c\u00e9lula completa. Eso es un gran avance para los investigadores, dijo Nedivi, porque los estudios sobre c\u00f3mo cambian las sinapsis en lo profundo de los cerebros de los animales vivos usan visores de baja resoluci\u00f3n cuyas im\u00e1genes generalmente deben validarse con m\u00e9todos de mayor resoluci\u00f3n. Tradicionalmente, eso se ha hecho con microscopios electr\u00f3nicos.<\/p>\n
\u00abPreferir\u00eda no usar EM, porque requiere mucho trabajo y no combina bien con el etiquetado\u00bb, dijo Nedivi, miembro del Instituto Picower y Departamentos de Biolog\u00eda y BCS del MIT. \u00abEl m\u00e9todo de Kwanghun ofrece la oportunidad de obtener el mismo tipo de resoluci\u00f3n, pero tambi\u00e9n de obtener im\u00e1genes de un tama\u00f1o de muestra mucho mayor por c\u00e9lula\u00bb.<\/p>\n
Adem\u00e1s, la tecnolog\u00eda permite m\u00faltiples rondas de etiquetado de anticuerpos del mismo tejido, por lo que los cient\u00edficos pueden etiquetar ricamente muchas prote\u00ednas dentro de la misma sinapsis. Trabajando con los laboratorios de Nedivi y Feng, el equipo de Chung demostr\u00f3 el etiquetado de hasta seis prote\u00ednas diferentes a lo largo de las sinapsis en dos especies de mam\u00edferos diferentes, mostrando c\u00f3mo est\u00e1n dispuestas a lo largo de las estructuras en ambos lados de la sinapsis.<\/p>\n
Nedivi y Los laboratorios de Chung tambi\u00e9n demostraron que al etiquetar los componentes de los receptores del neurotransmisor GABA en las sinapsis inhibidoras (llamadas as\u00ed porque reducen la probabilidad de que una neurona produzca una se\u00f1al el\u00e9ctrica), pod\u00edan examinar si difieren. De hecho, encontraron que un poco m\u00e1s de la mitad de las sinapsis inhibidoras tienen los dos componentes que buscaban, pero una cuarta parte no ten\u00eda ninguno y algunos solo ten\u00edan uno o el otro.<\/p>\n
\u00abEstos hallazgos confirman que las sinapsis inhibidoras no son homog\u00e9neos en su contenido molecular y muestran que eMAP es una herramienta poderosa para el interrogatorio cuantitativo del proteoma sin\u00e1ptico\u00bb, escribieron los autores. <\/p>\n
Explore m\u00e1s<\/p>\n
La nueva t\u00e9cnica puede revelar detalles del cerebro subcelular y conexiones de largo alcance M\u00e1s informaci\u00f3n:<\/strong> Joha Park et al, Epitope-preserving magnified analysis of proteome (eMAP), Science Advances ( 2021). DOI: 10.1126\/sciadv.abf6589 Informaci\u00f3n de la revista:<\/strong> Science Advances <\/p>\n Proporcionado por el Instituto Tecnol\u00f3gico de Massachusetts Cita<\/strong>: El m\u00e9todo de expansi\u00f3n de tejido de pr\u00f3xima generaci\u00f3n mejora la imagen neuronal (2022, 13 de enero) recuperado el 29 de agosto de 2022 de https:\/\/medicalxpress.com\/news\/2022-01-next-generation-tissue-expansion-method-neural.html Este documento est\u00e1 sujeto a derechos de autor. Aparte de cualquier trato justo con fines de estudio o investigaci\u00f3n privados, ninguna parte puede reproducirse sin el permiso por escrito. El contenido se proporciona \u00fanicamente con fines informativos.<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":" eMAP permite etiquetar m\u00faltiples prote\u00ednas en la misma sinapsis. En un nuevo estudio, los investigadores demostraron etiquetar hasta seis. Aqu\u00ed vemos tres: Fagot en azul, Piccolo en magenta y PSD-95 en verde. Los tres se combinan en el panel de la derecha. Cr\u00e9dito: Chung Lab\/MIT Picower Institute La gloria de las tecnolog\u00edas de expansi\u00f3n de … Continuar leyendo \u00abM\u00e9todo de expansi\u00f3n de tejido de pr\u00f3xima generaci\u00f3n mejora la imagen neural\u00bb<\/span><\/a><\/p>\n","protected":false},"author":1,"featured_media":0,"comment_status":"","ping_status":"","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"footnotes":""},"categories":[1],"tags":[],"class_list":["post-6797","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-general"],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/www.biblia.work\/articulos-salud\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/6797","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/www.biblia.work\/articulos-salud\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/www.biblia.work\/articulos-salud\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.biblia.work\/articulos-salud\/wp-json\/wp\/v2\/users\/1"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/www.biblia.work\/articulos-salud\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=6797"}],"version-history":[{"count":0,"href":"https:\/\/www.biblia.work\/articulos-salud\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/6797\/revisions"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/www.biblia.work\/articulos-salud\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=6797"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.biblia.work\/articulos-salud\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=6797"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/www.biblia.work\/articulos-salud\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=6797"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}