Medición del VIH latente
Células T infectadas por el VIHFLICKR, NIAIDLa mayoría de los tratamientos contra el VIH dependen de la activación de todas las células T de memoria CD4+ que albergan el reservorio latente (LR), que está compuesto por provirus del VIH inactivos integrados en los genomas de estos células en reposo. Conocer el tamaño de la LR es fundamental para medir el éxito de las terapias antivirales. Dos formas comunes de probar provirus en un paciente con VIH son el método basado en PCR, en el que el ADN del VIH integrado se amplifica y cuantifica mediante PCR y el ensayo de crecimiento viral (VOA). Para la VOA, las células T CD4+ de un paciente se recolectan y luego se activan in vitro, para que produzcan virus a partir de la LR y liberen proteínas virales que luego se pueden cuantificar. La PCR detecta muchos más provirus que la VOA y, en el pasado, se suponía que no todos los provirus detectados por la PCR eran aptos para la transcripción. Ahora,…
Creo que es un artículo excelente y un hallazgo muy provocativo, dijo el investigador del VIH Jonathan Karn, profesor de biología molecular en la Universidad Case Western Reserve, que no participó en el trabajo. La evidencia indica que la VOA probablemente subestima el reservorio latente, agregó Karn, lo cual es realmente una observación bastante importante. Conocer el tamaño real de los LR es esencial para los médicos que deben decidir cuándo un paciente puede suspender la terapia antirretroviral, señaló.
El VOA es un ensayo muy sensible para detectar todos los posibles virus liberados después de la activación máxima de las células T, por lo que la gente ha creído que esta escala del reservorio latente es lo que necesitamos erradicar, que es alrededor de una en un millón de células T CD4+ en reposo, dijo el primer autor Ya-Chi Ho, quien es becario postdoctoral en Johns Hopkins. El equipo de investigación comenzó así como se habría acercado a un VOA: activando las células T CD4+ de los pacientes. Luego usaron PCR para amplificar los provirus no inducidos por la activación y los secuenciaron directamente.
Los investigadores encontraron que el 88 por ciento de los provirus tenían defectos obvios que los harían incompetentes para la replicación, como deleciones o mutaciones en el codón de inicio. , lo cual fue consistente con las observaciones anteriores. Sin embargo, casi el 12 por ciento no tenía defectos de secuencia obvios, pero no fueron inducidos durante la primera ronda de activación de las células T. Los científicos examinaron la ubicación genómica y el estado de metilación de estos provirus. Descubrieron que la mayoría de los provirus no inducidos estaban en unidades de transcripción activas y no estaban metilados con CpG. También demostraron que más rondas de estimulación podrían inducir a algunos de los provirus a producir virus activos. Con base en estos resultados, los investigadores propusieron que la inducción de provirus es estocástica, y que el tamaño del LR es probablemente alrededor de 60 veces mayor que lo predicho previamente por VOA.
Creo que todos en el campo tenían la sensación de que hubo algo como esto para explicar la discrepancia entre el VOA y el ensayo basado en PCR, dijo Fabio Romerio, profesor asistente del Instituto de Virología Humana de la Facultad de Medicina de la Universidad de Maryland en Baltimore, quien no participó en el estudio. . Lo que fue realmente sorprendente, al menos para mí, fue que hay una alta frecuencia de células que no producen virus cuando se cultivan en el VOA y, sin embargo, contienen secuencias de VIH competentes para la replicación, continuó. Eso da miedo, dijo Romerio, porque el VIH latente debe inducirse in vivo para que los medicamentos antilatencia tengan éxito.
El documento confirma que obviamente hay dificultades con cada ensayo ex vivo, dijo David Margolis. , profesor de medicina en la Universidad de Carolina del Norte, Chapel Hill, que estudia la latencia del VIH pero no formó parte del trabajo. Ninguno de los datos es realmente sorprendente, pero es realmente importante que se muestre definitivamente, agregó, porque algunas personas siguen llamando a las medidas de ADN del VIH el reservorio del VIH. Eso no es cierto. Es una medida de infección persistente, pero la mayor parte de lo que está midiendo ya no es un reservorio, como lo demuestra este trabajo.
Un reservorio de VIH más grande puede sonar desalentador, pero los expertos acordaron que aunque el documento mostró precaución es requerido al interpretar todos los ensayos, es mejor comprender el tamaño completo del LR que estar en la oscuridad.
Creo que este documento es parte de un momento muy emocionante, donde empezamos a ver que había es un camino a seguir desde donde estamos, dijo Margolis. Creo que solo tenemos que ser muy rigurosos y seguir realizando estudios cuidadosos, pero difíciles, como este, que garantizarán un progreso importante.
El campo deberá lidiar con cómo proceder con la activación y el tratamiento in vivo. , basado en la nueva comprensión de que el VIH latente y capaz de replicarse puede no activarse, dijo Karn. Pero soy muy optimista de que podemos hacer esto bien, agregó.
Y. Ho et al., Los provirus no inducidos con capacidad de replicación en el reservorio latente aumentan la barrera para la cura del VIH-1, Cell, 155: 540551, 2013.
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