La edición de genes CRISPR más precisa hasta la fecha

ISTOCK, MOLEKUULTPara minimizar los efectos secundarios de la edición del genoma basada en CRISPR, los investigadores diseñaron una versión de Cas9, la enzima que corta el ADN, que evita errores con una precisión sin precedentes. La mutación de una parte de la nucleasa, llamada REC3, redujo los efectos fuera del objetivo por debajo de los de otras enzimas Cas9 de alta fidelidad.

“Si muta ciertos residuos de aminoácidos en REC3, puede modificar el equilibrio entre la actividad de Cas9 en el objetivo y la especificidad mejorada” la coautora Janice Chen, estudiante de posgrado en el laboratorio de Jennifer Doudna en la Universidad de California, Berkeley, en un comunicado de prensa. «Pudimos encontrar el punto óptimo donde hay suficiente actividad en el objetivo previsto, pero también una gran reducción en los eventos fuera del objetivo»,

Chen y sus colegas se propusieron comprender por qué ciertos las variantes de Cas9, a saber, eSpCas9 (1.1) y SpCas9-HF1, son más específicas para sus secuencias objetivo y hacen menos cortes fuera del objetivo que la versión natural. Fue entonces cuando…

Aprovechando esta observación, diseñamos una nueva variante Cas9 hiperprecisa (HypaCas9) que demuestra una alta especificidad en todo el genoma sin comprometer la actividad en el objetivo en las células humanas, escriben los autores. en su estudio, publicado el miércoles (20 de septiembre) en Nature.

Cuando probaron este nuevo HypaCas9 en seis sitios objetivo, los investigadores encontraron que en dos sitios la nucleasa no cometió errores , en tres sitios cometió un error y en un sitio alcanzó 18 loci no deseados. En comparación, Cas9 de tipo salvaje solo tuvo una puntuación perfecta una vez y, por lo demás, registró entre ocho y 134 efectos fuera del objetivo, según el sitio previsto. Las dos variantes de Cas9 más específicas funcionaron tan bien como HypaCas9 en cinco sitios, pero tuvieron algunos errores adicionales en el sexto.

Hemos encontrado que incluso alteraciones menores en el dominio REC3 de Cas9 afectan el diferencial entre la edición dentro y fuera del objetivo, lo que sugiere que este dominio es un candidato obvio para la mutagénesis en profundidad para mejorar la especificidad de la orientación, dice Chen en el comunicado. Como extensión de este trabajo, se podría realizar una mutagénesis más imparcial dentro de REC3 que las mutaciones dirigidas que hemos realizado.

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