Nueva prueba personalizada para una predicción más temprana y precisa de la recaída del cáncer en niños con ALL

MRD-flujo de trabajo multiplex para el desarrollo de ensayos de PCR MP de 4 plex específicos del paciente a través de un proceso iterativo. El diseño y análisis de MP PCR se puede realizar con diferentes herramientas de software ya disponibles. Además, el software especializado para el diseño multiplex MRD-PCR (Assay Manager GNWI mbH, Alemania) y el análisis estandarizado (ValidScale Hahn-Schickard eV, Alemania) han estado bajo validación clínica. Crédito: The Journal of Molecular Diagnostics

Los investigadores han desarrollado un nuevo protocolo para monitorear la leucemia linfoblástica aguda (LLA), el cáncer más común en los niños, para informar estrategias de tratamiento más efectivas y detectar la recurrencia de la enfermedad. La PCR de sonda mediadora personalizada (MP PCR) utiliza múltiples marcadores genómicos de células cancerosas en un solo ensayo y es más simple que las técnicas actuales. Mejora el seguimiento de la evolución tumoral clonal para detectar antes una recidiva y evitar falsos negativos. Su protocolo se detalla en el Journal of Molecular Diagnostics.

La tasa de supervivencia de los niños con ALL ha aumentado de manera impresionante a más del 80 % en las últimas décadas. Sin embargo, el pronóstico para los niños cuyo cáncer recurre sigue siendo desfavorable. Por lo tanto, el seguimiento de la enfermedad residual mínima (ERM) es un factor pronóstico importante para la respuesta al tratamiento y la estratificación de los pacientes. El control de MRD utiliza una PCR en tiempo real de alta sensibilidad para medir la cantidad de células cancerosas entre las células normales.

«Los marcadores de MRD pueden desaparecer durante el tratamiento, lo que puede dar lugar a resultados falsos negativos y a una mala toma de decisiones en tratamientos personalizados». tratamientos», explica la investigadora principal Cornelia Eckert, Ph.D., Departamento de Oncología/Hematología Pediátrica, CharitUniversittsmedizin Berlin, German Cancer Consortium (DKTK) y German Cancer Research Center (DKFZ). En consecuencia, se recomienda monitorizar al menos dos marcadores independientes por paciente. El Dr. Eckert continúa: «Las pautas actuales del consorcio EuroMRD estándar de oro exigen la amplificación mediante la cuantificación de PCR en tiempo real singleplex, lo que hace que las pruebas de marcadores adicionales sean más laboriosas y costosas. También conducen a un mayor consumo de material del paciente».

Para superar estas limitaciones, el Dr. Eckert y los co-investigadores establecieron la MP PCR personalizada, un flujo de trabajo iterativo y pautas para diseñar PCR multiplex en tiempo real para monitorear hasta cuatro marcadores MRD para ALL simultáneamente en un ensayo. Cuando se probaron en ADN en muestras de médula ósea de pacientes con LLA, las MP PCR cumplieron con las pautas estándar de oro de EuroMRD y el nivel de sensibilidad para la toma de decisiones clínicas.

Co-investigador Michael Lehnert, Ph.D., Hahn-Schickard Freiburg, afirma: «La multiplexación puede mejorar significativamente el control personalizado de MRD de los pacientes, porque se puede analizar una mayor cantidad de marcadores de MRD por paciente al mismo tiempo. Aunque estas secuencias de células cancerosas específicas del paciente solo difieren en unos pocos nucleótidos de ADN de células sanas, nuestro ensayo multiplex aún puede distinguir entre estas secuencias de ADN. Por lo tanto, se puede incluir en el ensayo una gama más amplia de secuencias específicas de pacientes».

Las pautas de MRD-MP son simples y puede permitir la estandarización del ensayo en diferentes laboratorios. Para demostrar la transferencia potencial de la PCR MP dúplex a un entorno de diagnóstico de rutina, el nuevo ensayo se aplicó en un caso de paciente evaluado prospectivamente en comparación con la prueba singleplex estándar de oro. Ambos cumplieron con las pautas de EuroMRD y condujeron a un rango cuantitativo y una sensibilidad similares.

Para enfrentar los desafíos inherentes a la PCR multiplex, los investigadores desarrollaron un flujo de trabajo iterativo eficiente para el diseño y la optimización de la PCR. La titulación de cebadores de ADN solo está involucrada y extendida si el rendimiento del ensayo no es suficiente en el primer paso, de modo que se minimice el número de iteraciones.

«Existe una gran variedad de secuencias de marcadores de ADN únicas para cada leucemia ”, agrega la primera autora Elena Kipf, Ph.D., Hahn-Schickard Freiburg. «El flujo de trabajo MRD-multiplex proporciona una forma sistemática y confiable de diseño y optimización efectivos de MRD-MP PCR y ayuda a la estandarización de diagnósticos personales».

Si bien su trabajo demuestra que multiplex MP PCR tiene el potencial de establecer un nuevo estándar en la monitorización personalizada de MRD, los investigadores señalan que debe validarse clínicamente en una cohorte representativa de TODOS los pacientes. «El cáncer es una enfermedad mortal de la que no todos los pacientes pueden curarse», subraya el Dr. Eckert. «Después de una validación clínica exitosa, los pacientes podrían beneficiarse de un control extendido de la MRD, lo que conduciría a predicciones más precisas de la respuesta a la terapia y una mejor estratificación y resultados de los pacientes».

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Ensayo para el control y el tratamiento específicos del paciente para el cáncer de ovario Más información: Elena Kipf et al, Advanced Minimal Residual Disease Monitoring for Acute Lymphoblastic Leukemia with Multiplex Mediator Probe PCR, El Diario de Diagnóstico Molecular (2021). DOI: 10.1016/j.jmoldx.2021.10.001 Información de la revista: Journal of Molecular Diagnostics

Proporcionado por Elsevier Cita: Nueva prueba personalizada para una evaluación más temprana y precisa predicción de la recaída del cáncer en niños con LLA (8 de febrero de 2022) consultado el 29 de agosto de 2022 de https://medicalxpress.com/news/2022-02-personalized-earlier-accurate-cancer-relapse.html Este documento está sujeto a derechos de autor . Aparte de cualquier trato justo con fines de estudio o investigación privados, ninguna parte puede reproducirse sin el permiso por escrito. El contenido se proporciona únicamente con fines informativos.