Nuevo ensayo se muestra prometedor para avanzar en el tratamiento personalizado del cáncer

Demostración de la sensibilidad, selectividad y repetibilidad de los ensayos SuperSelective PCR que contienen fragmentos de ADN de 10 000 copias de ADN genómico humano, en las que la actina sirve como gen de referencia de tipo salvaje ( azul), y que además contienen los siguientes fragmentos de ADN: 1.000 mutaciones puntuales EGFR T790M (verde); 100 mutaciones por deleción de EGFR E745-A750 (rojo); 10 mutaciones puntuales de EGFR G719C (naranja); y sin mutaciones puntuales de EGFR L858R (gris). Crédito: Journal of Molecular Diagnostics

Usando una muestra de sangre de rutina, los investigadores han desarrollado un ensayo extremadamente sensible para detectar y cuantificar fragmentos de ADN que contienen mutaciones genéticas raras en las células cancerosas de un paciente. Este ensayo utiliza cebadores de PCR «superselectivos» que prácticamente ignoran abundantes fragmentos de ADN no mutantes estrechamente relacionados derivados de las células normales de los pacientes. Este nuevo ensayo es más rápido y considerablemente más económico que los métodos actuales y se puede realizar con instrumentos ampliamente disponibles. Los investigadores demuestran la facilidad de utilidad de este enfoque en un nuevo informe en el Journal of Molecular Diagnostics.

«El objetivo a largo plazo de esta investigación es desarrollar ensayos altamente multiplexados que permitan tanto la detección temprana de mutaciones relevantes para el cáncer antes de que se presenten síntomas como la aplicación de un tratamiento temprano eficaz. Estos ensayos utilizarán biopsias líquidas no invasivas (muestras de sangre de rutina) tomadas durante el chequeo médico anual de una persona, y los fragmentos de ADN presentes transitoriamente en la muestra de sangre (que se originan de células que han muerto) luego se analizarán mediante técnicas de PCR digitales o en tiempo real altamente multiplexadas», explicaron los investigadores principales. Diana Yaneth Vargas, MS, y Fred Russell Kramer, Ph.D., del Public Health Research Institute of the New Jersey Medical School of Rutgers University, Newark, NJ, EE. UU.

Técnicas actuales para analizar biopsias líquidas involucrar el análisis de secuencias de próxima generación, que es costoso, largo y tiene una sensibilidad limitada; o utilice una técnica de PCR en la que se amplifican tanto los fragmentos de ADN mutantes como los fragmentos de ADN de tipo salvaje estrechamente relacionados, lo que limita la sensibilidad cuando los fragmentos de ADN mutantes son escasos. El diseño único de los cebadores SuperSelective PCR, por otro lado, permite la amplificación de los fragmentos de ADN mutantes, al mismo tiempo que previene de manera efectiva la amplificación de los abundantes fragmentos de ADN de tipo salvaje estrechamente relacionados. En consecuencia, los ensayos de PCR SuperSelective descritos en este informe son muy sensibles.

Los ensayos de PCR SuperSelective Multiplex, que utilizan biopsias líquidas no invasivas frecuentes, permiten elegir y modificar posteriormente una terapia dirigida eficaz para el tratamiento de una cáncer del individuo. Además, después del tratamiento, estos ensayos pueden ayudar a monitorear al paciente para detectar la presencia de enfermedad residual mínima, lo que permite una intervención adicional si es necesario.

Para demostrar el potencial clínico de su enfoque, seis muestras de ADN del plasma de Se ensayaron pacientes con cáncer. Las muestras de cinco de los pacientes fueron cegadas. Se realizaron ensayos de PCR SuperSelective Multiplex para confirmar la presencia o ausencia de mutaciones específicas del receptor del factor de crecimiento epidérmico humano (EGFR) en cada muestra. Se eligieron estas mutaciones porque su presencia determina qué terapia dirigida tiene más probabilidades de ser eficaz contra el cáncer de pulmón de células no pequeñas. Cuatro muestras dieron positivo para diferentes mutaciones diana de EGFR y dos muestras no dieron señales de mutaciones diana de EGFR. Después de que se desenmascararon las muestras ciegas, se reveló que las dos muestras negativas eran de pacientes que no tenían mutaciones de EGFR, y esas muestras se proporcionaron deliberadamente como control. Los ensayos identificaron las mutaciones previamente conocidas en las otras muestras. Significativamente, el ensayo también identificó una mutación de resistencia muy rara en una muestra ciega que no se sabía previamente que estaba presente, lo que sugiere que era necesario cambiar la terapia dirigida del paciente.

«La única diferencia entre estos ensayos y La PCR en tiempo real múltiplex convencional es la sustitución de cebadores SuperSelective por cebadores convencionales», dijeron los investigadores. «Estos ensayos se pueden realizar rápidamente en los puntos de atención y los resultados se pueden usar de inmediato para informar las decisiones clínicas posteriores».

Los autores señalan que esta tecnología podría tener otras aplicaciones médicas, como la identificación de bacterias raras resistentes a los antibióticos y la identificación de genes mutantes raros que se encuentran en las células fetales que circulan en el plasma de una madre. Por lo tanto, es probable que la disponibilidad de ensayos de PCR SuperSelective multiplex sensibles tenga una amplia utilidad clínica».

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Nueva prueba personalizada para una predicción más temprana y precisa de la recaída del cáncer en niños con LLA Más información : Diana Y. Vargas et al, Ensayos de PCR superselectiva múltiplex para la detección y cuantificación de mutaciones somáticas raras en biopsias líquidas, The Journal of Molecular Diagnostics (2021). DOI: 10.1016/j.jmoldx.2021.11.006 Información de la revista: Journal of Molecular Diagnostics

Proporcionado por Elsevier Cita: Nuevo ensayo muestra promesa para avanzar en el tratamiento personalizado del cáncer (2022, 11 de febrero) consultado el 29 de agosto de 2022 en https ://medicalxpress.com/news/2022-02-assay-advancing-personalized-cancer-treatment.html Este documento está sujeto a derechos de autor. Además de cualquier trato justo con fines de estudio o investigación privados, ninguna parte puede ser reproducida. sin el permiso por escrito. El contenido se proporciona únicamente con fines informativos.