Nueva prueba de ARN de COVID-19 brinda resultados precisos en cuestión de minutos
Crédito: Unsplash/CC0 Dominio público
Investigadores de la Universidad de Birmingham inventaron una prueba de COVID-19 que reduce el tiempo de prueba de 30 minutos a menos de cinco y brinda resultados precisos .
El método se describe en un artículo preliminar (aún no revisado por pares) publicado en MedRxiv, donde los investigadores también demuestran la rapidez y la sensibilidad de su método utilizando muestras de ARN de pacientes proporcionadas por Public Health England.
El profesor Tim Dafforn de la Facultad de Biociencias de la Universidad comentó: «Hemos diseñado un nuevo método de prueba que combina la facilidad de uso y la velocidad de la prueba de flujo lateral con la sensibilidad inherente de una prueba de ARN. Cuenta con reactivos que se pueden usar en dispositivos de punto de atención existentes y satisface la necesidad de realizar pruebas en entornos de alto rendimiento, cercanos al paciente, donde las personas pueden estar esperando en fila para obtener sus resultados».
El estándar de oro actual es la cadena de polimerasa de transcripción inversa Prueba de reacción (RT-PCR). Esto lleva más de una hora por muestra y consta de dos pasos. El primero, que dura 30 minutos, utiliza una enzima transcriptasa inversa para convertir el ARN en ADN. El segundo utiliza una enzima ADN polimerasa para copiar el ADN y amplificarlo a niveles detectables, y requiere ciclos de calentamiento y enfriamiento que consumen mucho tiempo. Aunque este año se han desarrollado procesos de temperatura única, reducir este paso por debajo de los 20 minutos ha resultado ser un desafío. Las pruebas de flujo lateral, que miden la presencia de anticuerpos, pueden demorar hasta 30 minutos.
Los investigadores crearon un nuevo enfoque de un solo paso para convertir el ARN viral en ADN y lo combinaron con una técnica conocida llamada Exponencial. Reacción de amplificación (EXPAR), que aumenta la concentración de ADN a niveles detectables a una temperatura constante. Están llamando al nuevo método prueba EXPAR libre de transcriptasa inversa (RTF-EXPAR).
La Universidad de Birmingham Enterprise ha presentado una solicitud de patente que cubre el método y su uso en equipos de diagnóstico, y ahora está tratando de obtener la licencia del patente para el desarrollo rápido de productos.
El método utiliza una secuencia de ADN (llamada ADN Binder) que reconoce y se une al ARN viral del SARS-CoV-2 y una enzima (BstNI) que reconoce el ADN Binder y corta una pequeña sección de él cuando el ARN viral está presente. Una vez que se ha producido esta escisión, el ARN viral queda libre para unirse a más ADN Binder y el ciclo se repite. La prueba detecta el resultado de este ciclo.
Los investigadores probaron el método introduciendo muestras de BstNI, Binder DNA y SARS-CoV-2 en reactivos EXPAR e incubando a una temperatura constante de 50oC. Estas condiciones arrojaron resultados de prueba en 4,00 +/- 0,72 minutos para la muestra positiva. No se observó señal para la muestra negativa (control) después de 10 minutos de incubación. La concentración de ARN del SARS-CoV-2 en la muestra positiva fue de 72,7 copias/L, un valor hasta diez veces inferior a la carga viral promedio encontrada en muestras de pacientes con COVID-19.
El método fue desarrollado para reducir el tiempo y aumentar el rendimiento en las pruebas de COVID-19. Sin embargo, la técnica podría aplicarse a cualquier agente infeccioso basado en ARN o biomarcador de enfermedad (incluido el cáncer), por lo que, a largo plazo, se espera que el uso de RTF-EXPAR se extienda más allá del SARS-CoV-2.
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Siga las últimas noticias sobre el brote de coronavirus (COVID-19) Más información: Jake G Carter et al. Detección de ARN del SARS-CoV-2 en menos de 5 minutos mediante una reacción de amplificación exponencial libre de transcriptasa inversa, RTF-EXPAR, (2021). DOI: 10.1101/2020.12.31.20248236 Proporcionado por la Universidad de Birmingham Cita: La nueva prueba de ARN de COVID-19 brinda resultados precisos en minutos (5 de enero de 2021) consultado el 30 de agosto de 2022 en https://medicalxpress.com /news/2021-01-covid-rna-accurate-results-minutes.html Este documento está sujeto a derechos de autor. Aparte de cualquier trato justo con fines de estudio o investigación privados, ninguna parte puede reproducirse sin el permiso por escrito. El contenido se proporciona únicamente con fines informativos.