Sondeo de la inmunidad innata, proteína cGAS y nuestro propio ADN dañado
La inhibición de cGAS humano y de ratón con RU.521 reduce la expresión de interferón en múltiples tipos de células. Las líneas utilizadas fueron: células THP-1 y sus derivados (ac), RAW 267.4 (d) y HEK293 (eg). Se transfectaron células THP-1 KO-cGAS con vector de control de plásmido o con un plásmido que contenía h-cGAS, y se trataron con vehículo (DMSO) o RU.521 (a, panel izquierdo). Las células WT THP-1 se trataron de forma simulada (unt) o se estimularon con 0,3 g/mL de HT-DNA +/ RU.521, seguido de un análisis de RT-qPCR para la expresión de IFNB1 (a, panel derecho). También se realizó un ELISA para IFNB1 humano en células THP-1 estimuladas con HT-DNA +/ RU.521 (0,8 M) (b). Se generó una curva de dosis-respuesta para RU.521 utilizando células ISG THP-1 Lucia inmunoactivadas (c). Las células RAW-Lucia ISG KO cGAS se transfectaron con plásmidos que expresaban WT m-cGAS o h-cGAS, y la actividad se leyó a través del indicador de luciferasa (d). Las células HEK293 se transfectaron con cGAS humano o de ratón además de h-STING, en presencia o ausencia de RU.521. Luego, los niveles de ARN para IFNB1 e IFIT2 se midieron mediante RT-qPCR (e, f). Se usó la transfección de la columna vertebral del vector para normalizar los datos. El análisis de inmunotransferencia de h-STING, h-cGAS y m-cGAS transfectados en células HEK293 +/ RU.521 muestra que la expresión de la proteína no se ve alterada por la adición de la molécula pequeña. Se usó GM130 para normalizar los datos (g). El número mínimo de repeticiones biológicas y técnicas para los ensayos fue de tres y tres, respectivamente (n=9). Las barras de error representan SEM. Los asteriscos (*) indican P0.05 donde se usó una prueba t no pareada con corrección de Welchs para comparar los resultados. Crédito: Informes científicos (2020). DOI: 10.1038/s41598-020-64348-y
La proteína cGAS desempeña un papel esencial en la inmunidad celular innata al detectar el ADN de patógenos invasores como bacterias y virus, o nuestro propio ADN dañado y mal localizado. La activación de la vía de señalización de cGAS-STING produce una respuesta inmunitaria proinflamatoria, y la activación prolongada de cGAS puede provocar trastornos autoinmunitarios similares al lupus.
Manuel Ascano, Ph.D., y sus colegas identificaron previamente el compuesto RU.521 como un inhibidor de cGAS de ratón. Ahora demuestran que RU.521 también inhibe potente y selectivamente la cGAS humana en líneas celulares y en células primarias humanas. Demostraron que RU.521 suprimió la actividad de cGAS de manera dependiente de la dosis y no suprimió las respuestas inmunitarias activadas por señales que no son de ADN.
El estudio, publicado el 5 de mayo en Scientific Reports, valida el uso de RU.521 como herramienta para evaluar la contribución del eje de señalización cGAS-STING en diversas respuestas inmunitarias. El compuesto también podría servir como andamio químico para el desarrollo de terapias potenciales para enfermedades autoinmunes relacionadas con cGAS.
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Un cambio para la autoinmunidad Más información: Caroline Wiser et al. La inhibición de moléculas pequeñas de cGAS humano reduce la producción total de cGAMP y la expresión de citoquinas en las células, Scientific Reports (2020). DOI: 10.1038/s41598-020-64348-y Información de la revista: Informes científicos
Proporcionado por la Universidad de Vanderbilt Cita: Investigación de la inmunidad innata, la proteína cGAS y la nuestra ADN dañado (22 de mayo de 2020) recuperado el 31 de agosto de 2022 de https://medicalxpress.com/news/2020-05-probing-innate-immunity-cgas-protein.html Este documento está sujeto a derechos de autor. Aparte de cualquier trato justo con fines de estudio o investigación privados, ninguna parte puede reproducirse sin el permiso por escrito. El contenido se proporciona únicamente con fines informativos.