Desarrollo y eficacia del sistema pseudotipado SARS-CoV-2
Fig. 1. Identificación de la expresión de la proteína S del SARS-CoV-2 y del virus pseudotipado del SARS-CoV-2. (A) Construcción e identificación del plásmido que expresa S. El gen de la proteína SARS-CoV-2 S se insertó en el vector pCDNA3.1. (B) Ensayo de inmunofluorescencia para la expresión de proteína S en el plásmido pcDNA3.1-SARS-CoV-2 S. La expresión se determinó usando pAb de ratón contra la proteína S del SARS-CoV-2 y muestras de suero convaleciente de pacientes con COVID-19. (C) Identificación de la expresión de la proteína S en el virus pseudotipado SARS-CoV-2 mediante ensayo de inmunotransferencia. Las bandas correspondientes a las proteínas SARS-CoV-2 S y HIV-1 p24 se detectaron en la misma línea de muestra en el gel. Crédito: Compuscript Ltd
La enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19) se ha convertido en una pandemia mundial. Actualmente, los experimentos asociados con el virus vivo SARS-CoV-2 deben manejarse en instalaciones de nivel de bioseguridad 3 (BSL-3). Anteriormente, los investigadores habían establecido con éxito un sistema de virus pseudotipado basado en el VIH para estudios sobre el MERS-CoV y el virus del Ébola. Usando el sistema de virus pseudotipificados, la investigación asociada a la entrada viral, por ejemplo, ensayos de neutralización y farmacodinámica in vitro, puede llevarse a cabo en las instalaciones de BSL-2.
En este estudio, los autores han desarrollado un sistema de SARS-CoV-2 pseudotipado que funciona de manera eficiente en una instalación BSL-2. Con la transfección de dos plásmidos en células HEK293T, los autores desarrollaron un virus pseudotipado basado en el núcleo del VIH-1 que consiste en la proteína de punta del SARS-CoV-2 y encontraron la línea celular Huh7.5 adecuada para el análisis del sistema pseudotipado del SARS-CoV-2. Los autores utilizaron el suero convaleciente de 11 pacientes con COVID-19 para comparar los resultados de la microneutralización del virus vivo SARS-CoV-2 y el sistema SARS-CoV-2 pseudotipado y notaron una correlación significativa entre los resultados obtenidos por los dos métodos.
El sistema de SARS-CoV-2 pseudotipado, desarrollado en este estudio, parece altamente confiable para realizar la investigación asociada a la entrada viral del SARS-CoV-2 en una instalación BSL-2. El sistema es adecuado para análisis de alto rendimiento e I+D de vacunas y fármacos.
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